核酸提取问题手册——DNA提取

● DNA提取常见问题 ●

提取的基因组DNA生物活性差

1. 提取的基因组DNA中盐分浓度过高。请严格按照说明书操作。

2. 提取的基因组DNA中含有乙醇。离心的速度和时间应该严格遵循说明书要求进行。

A260/280比值偏低/偏高

1. A260/280比值偏低可能是由于蛋白质残留，或者操作过程中使用了苯酚，也可能是苯酚残留。此外，水作为洗脱液时也可能导致比值偏低。

2. A260/280比值偏高可能是由于大量RNA残留，没有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。

提取的细菌基因组DNA降解

1. 确认选用的培养菌体是否新鲜，如果菌体需要保存时，请于-80℃保存。

2. 起始菌液量过多，导致菌液裂解不充分，部分DNA降解。

3. 菌体本身富含DNA酶活性，加入Digestion solution后再加20uL 0.5M EDTA溶液来抑制内源性核酸酶。

碱裂解法提取的质粒DNA进行琼脂糖电泳进行鉴定时，看到的三条带分别是什么？

碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，得到的三条带是以电泳速度的快慢排序的，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。

为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊醇？

在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊醇为24：1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24：1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。